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一、實(shí)驗(yàn)原理各種細(xì)胞操作，包括傳代、凍存和原代組織的分離，均能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。為了確定群體細(xì)胞中的存活細(xì)胞數(shù)，可采用臺(tái)盼藍(lán)染料排斥實(shí)驗(yàn)（Phillips1973)。正常的健康細(xì)胞能排斥染料，但細(xì)胞膜完整性喪失后臺(tái)盼藍(lán)可彌散入細(xì)胞內(nèi)。染料排斥實(shí)驗(yàn)是一種粗糙的估計(jì)細(xì)胞活力的方法，無法區(qū)別10%~20%的活力差異。除此之外，排斥染料的細(xì)胞有可能不貼壁或不能較長時(shí)問生存或繁殖。二、實(shí)驗(yàn)方法1)胰蛋白酶處理細(xì)胞，無菌狀態(tài)下取0.5ml細(xì)胞用PBS稀釋至每毫升2X105~4X105。2)向...

一、細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩大類。本實(shí)驗(yàn)室主要是質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、miRcroRNA轉(zhuǎn)染、慢病毒轉(zhuǎn)染、藥物轉(zhuǎn)染、多肽轉(zhuǎn)染等。二、miRcroRNA轉(zhuǎn)染（一）實(shí)驗(yàn)材料及試劑六孔板、CO2培養(yǎng)箱、EP管、酒精燈等；無血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM、RNA、lipofectamine2000、MSC細(xì)胞等。（二）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1當(dāng)六孔板中MSC細(xì)胞密度達(dá)90％時(shí)，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染，將無血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM取出...

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期1。實(shí)驗(yàn)原理用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，通常用碘化丙啶（propidiumiodide，PI）染細(xì)胞核。PI在一定波長的光下發(fā)出熒光，其強(qiáng)度與DNA含量成正比。通過流式細(xì)胞儀分析各時(shí)期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，可檢測(cè)細(xì)胞的增殖、凋亡。2。流式細(xì)胞儀檢測(cè)A549細(xì)胞周期步驟收集對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，計(jì)數(shù)，以(1~5)×105/孔接種于6孔板，置37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)過夜，使細(xì)胞貼壁。次日更換培養(yǎng)液，各孔分別加入含有0、80、400、2000、10000mg/L不同濃度茶...

1、炎癥灶內(nèi)主要是巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤。單核吞噬細(xì)胞的浸潤對(duì)慢性炎癥十分重要。單核細(xì)胞從血管游出后轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞還可被激活。在炎癥灶局部巨噬細(xì)胞的積聚有三方面的原因：①由于從炎癥灶不斷產(chǎn)生吸引單核細(xì)胞的趨化因子，如C5a、纖維蛋白多肽、陽離子蛋白質(zhì)及膠原和纖維粘連蛋白的分解產(chǎn)物等。因此，從血液循環(huán)中滲出的單核細(xì)胞源源不斷來到局部，這是局部巨噬細(xì)胞的主要來源。②游出的巨噬細(xì)胞在局部通過有絲分裂而增殖，但巨噬細(xì)胞局部增殖的起始動(dòng)因還不清楚。③炎癥灶內(nèi)的巨噬細(xì)胞...

激光掃描共聚焦顯微鏡可測(cè)定的樣品種類很多．包括生物材料、組織(切片)、細(xì)胞(亞細(xì)胞)結(jié)構(gòu)等。樣品中熒光的來源主要有如下幾種：自發(fā)熒光(autofluorescence)、熒光染色、免疫熒光、熒光蛋白、誘發(fā)熒光(inducedfluorescence)及酶致熒光(enzymaticallyproducedfluorescence)等等。其中大部分熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長均可在儀器自帶軟件的染料信息庫中找到。1．觀察步驟及儀器操作根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求制備樣品完畢后。即可進(jìn)行觀察。基本步驟如...

人非小細(xì)胞肺癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型的建立：（1）探討肺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和阻斷其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的研究；（2）模擬晚期非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的自然發(fā)生過程；（3）在活體動(dòng)物的完整器官內(nèi)評(píng)估瘤細(xì)胞播散和腫瘤的生長。實(shí)驗(yàn)方法原理將表達(dá)GFP的質(zhì)粒pRNAT-U6/Neo轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞A549，G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)GFP細(xì)胞，對(duì)比轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的生長活性和成瘤性。將轉(zhuǎn)染后細(xì)胞原位種植裸鼠預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)處死。HE染色和免疫組化檢測(cè)轉(zhuǎn)移灶的位置和數(shù)目。利用KODAKIS2000MM系統(tǒng)檢測(cè)腫瘤播散情況。實(shí)驗(yàn)材...

人胃癌高轉(zhuǎn)移模型的建立可以：（1）研究腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制；（2）研究腫瘤防治；（3）為腫瘤轉(zhuǎn)移研究提供更為理想的動(dòng)物模型。腫瘤組織塊原位移植法實(shí)驗(yàn)方法原理用人胃癌組織塊SGC-7901原位移植于SCID小鼠，第4周末移植瘤向淋巴結(jié)和肝臟等器官轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率達(dá)66.7%(2/3)，第6周末轉(zhuǎn)移率高達(dá)*(10/10)。實(shí)驗(yàn)材料雄性SPF級(jí)SCID小鼠人胃癌組織SGC-7901試劑、試劑盒水合氯醛福爾馬林液儀器、耗材飼養(yǎng)籠光學(xué)顯微鏡石蠟實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.雄性SPF級(jí)SCID小鼠，...